T/CVMA 217-2025 棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法

​​T/CVMA 217-2025《棘球蚴蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法》主要内容总结​​

​​1. 标准概述​​

• ​​标准性质​​：中国兽医协会发布的团体标准，适用于牛、羊血清中棘球蚴蚴（包虫）抗体的检测。
• ​​技术原理​​：基于时间分辨荧光免疫层析技术（TRFIA）和双抗原夹心法，通过荧光信号（T/C值）判定抗体水平。
• ​​适用范围​​：检测牛、羊血清样本，需符合NY/T 541的采样和保存要求。

​​2. 核心内容​​

​​（1）试剂与耗材​​

• ​​关键试剂​​：
  • 荧光微球检测试纸（含Eg95抗原标记的荧光微球、硝酸纤维素膜等）。
  • 配套试剂（如样品稀释液、封闭液、EDC活化液等，配方见附录B）。
• ​​设备​​：便携式免疫荧光分析仪（365/610nm波段）、微量移液器、离心机等。

​​（2）样本处理​​

• ​​采集​​：按NY/T 541规范采集全血，离心分离血清，避免溶血或污染。
• ​​保存​​：短期（1周内）2~8℃保存，长期需-20℃以下冷冻，避免反复冻融。

​​（3）检测步骤​​

1. ​​样本稀释​​：10μL血清与稀释液混匀（10倍稀释）。
2. ​​加样​​：滴加80μL稀释样本至检测卡加样孔。
3. ​​孵育​​：室温反应10~15分钟。
4. ​​读值​​：插入荧光分析仪，25分钟内完成检测（超时无效）。

​​（4）结果判定​​

• ​​计算​​：仪器自动计算T/C值（检测线T值与质控线C值比值）。
• ​​判定标准​​：
  • ​​阴性​​：T/C < 0.1。
  • ​​阳性​​：T/C ≥ 0.1。
• ​​有效性​​：质控线（C线）信号正常且仪器显示数值有效。

​​3. 附录关键内容​​

​​附录A：检测试纸制备​​

• ​​Eg95抗原制备​​：
  • 基因工程表达：大肠杆菌发酵（IPTG诱导）、Ni柱纯化、SDS-PAGE验证纯度。
• ​​荧光微球标记​​：
  • 微球活化（EDC/MES）、抗原偶联（15μg/mL）、封闭（酪蛋白）。
• ​​试纸组装​​：
  • 各组件（样品垫、荧光微球垫、NC膜、吸水垫）层叠粘贴，切条装卡。

​​附录B：试剂配方​​

• 详细列出缓冲液（如PBS pH 8.0）、封闭液（9%酪蛋白）、EDC溶液等配制方法。

​​附录C：仪器操作​​

• ​​ID卡​​：预存检测项目信息（临界值等）。
• ​​检测流程​​：插入ID卡→加样→读值→自动输出结果（可打印/上传）。

​​4. 其他要点​​

• ​​专利声明​​：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
• ​​起草单位​​：中国动物疫病预防控制中心牵头，多省疾控中心及企业参与。
• ​​实施日期​​：2025年2月14日发布并实施。

​​5. 技术优势​​

• ​​高灵敏度​​：时间分辨荧光技术降低背景干扰。
• ​​便捷性​​：便携式仪器支持现场快速检测（15分钟出结果）。
• ​​标准化​​：从抗原制备到结果判定的全流程规范，确保一致性。

该标准为包虫病防控提供了可靠的抗体检测方法，适用于兽医临床和疫病监测。

相关资料