DB43/T 3137-2024 犬蛔虫检验技术规程

以下是湖南省地方标准《DB 43/T 3137-2024 犬蛔蛔虫检验技术规程》的详细内容总结：

​​一、范围​​

1. ​​适用对象​​：犬蛔蛔虫（包括犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫）的检验、监测及药物驱虫效果评估。
2. ​​主要内容​​：规定检验方法、结果判定及鉴别检验流程。

​​二、术语与定义​​

• ​​犬蛔蛔虫（Toxocara canis）​​：弓首科弓首属寄生虫，含犬弓首蛔虫（Toxocara canis）和狮弓蛔虫（Toxascaris leonina）。

​​三、检验方法​​

​​（一）材料准备​​

1. ​​设备​​：光学显微镜、电子秤。
2. ​​试剂​​：70%酒精、饱和食盐水、蒸馏水、生理盐水。
3. ​​耗材​​：镊子、自封袋、0.15 mm过滤筛、移液枪、烧杯、试管、载玻片等。

​​（二）样品采集​​

• 采集新鲜犬粪，记录来源、品种、年龄等信息，4°C–8°C保存且≤24小时。

​​（三）虫卵检查​​

1. ​​直接涂片法​​：
   • 取1g粪便与生理盐水混合涂片，镜检（重复6–8次）。
2. ​​饱和食盐水漂浮法​​：
   • ​​试管法​​：1–2g粪便+饱和食盐水→静置30分钟→取液面盖玻片镜检（4×10倍）。
   • ​​烧杯法​​：5–8g粪便+10倍饱和食盐水→静置30分钟→蘸取液面镜检。

​​（四）虫体检查​​

• 挑取粪便中虫体，生理盐水清洗→70%酒精保存→镜检（4×10倍）观察头部、尾部、体侧形态。

​​四、结果判定​​

1. ​​虫卵阳性​​：镜检发现犬弓首蛔虫卵或狮弓蛔虫卵（形态见附录A）。
2. ​​虫体阳性​​：检出犬弓首蛔虫或狮弓蛔虫成虫（形态见附录B）。

​​五、鉴别检验​​

​​（一）形态学鉴别​​

1. ​​虫卵特征​​（附录A）：
   • ​​犬弓首蛔虫卵​​：近圆形（Ø≈85μm），黄褐色，卵壳厚且表面凹陷，内含单一大卵细胞。
   • ​​狮弓蛔虫卵​​：近椭圆形（85×71μm），黄色，卵壳薄，卵细胞与卵壳间有“新月状”空隙。
   • ​​对比虫卵​​：犬鞭虫（腰鼓形）、犬钩口线虫（含8卵细胞）、犬旋尾线虫（长椭圆形）。
2. ​​成虫特征​​（附录B）：
   • ​​犬弓首蛔虫​​：淡黄色，头端有3片唇和颈翼膜，雄虫尾端弯曲有尾翼（5–11cm），雌虫尾直（9–18cm）。
   • ​​狮弓蛔虫​​：淡褐色，头端弯曲有柳叶型颈翼，雄虫交合刺不等长（3–7cm），雌虫阴门位于体前1/3处（3–10cm）。
   • ​​对比虫体​​：犬钩口线虫（口囊具齿）、犬鞭虫（鞭形）、犬旋尾线虫（螺旋形）。

​​（二）分子生物学鉴别（附录C）​​

1. ​​DNA提取​​：
   • 虫体片段+蛋白酶K消化→试剂盒提取DNA。
2. ​​PCR扩增​​：
   • ​​引物​​：
     • ITS基因：NC5（5’-GTAGGTGAAC…-3’） + NC2（5’-TTAGTTTCTT…-3’）→850bp。
     • cox1基因：JB3（5’-TTTTTTGGGC…-3’） + JB4.5（5’-TAAAGAAAGA…-3’）→450bp。
   • ​​扩增条件​​：
     • ITS：94℃预变性5min→35循环（94℃ 30s, 50℃ 30s, 72℃ 1min）→72℃延伸5min。
     • cox1：95℃预变性5min→38循环（95℃ 30s, 55℃ 30s, 72℃ 30s）→72℃延伸5min。
3. ​​结果判定​​：
   • PCR产物测序→BLAST比对→序列相似度≥98%判定为犬蛔蛔虫。

​​六、附录关键信息​​

• ​​附录A​​：虫卵形态对比表（大小、颜色、卵壳、卵细胞特征）。
• ​​附录B​​：成虫形态对比表（颜色、头部、雄/雌虫结构差异）。
• ​​附录C​​：分子检测全流程（DNA提取、引物序列、PCR参数）。

​​核心总结​​

• ​​检验核心​​：通过粪便虫卵漂浮法/涂片法和虫体形态学观察进行初筛，结合PCR分子鉴定提高准确性。
• ​​鉴别要点​​：
  • 虫卵区分关键：大小、卵壳特征、卵细胞形态及间隙。
  • 成虫区分关键：头颈结构（翼膜、唇片）、生殖器位置及交合刺形态。
• ​​适用场景​​：兽医诊断、疫病监测、驱虫药效评估。

此标准为湖南省犬蛔虫病防控提供了标准化操作指南，兼顾传统形态学与分子生物学技术。

相关资料