T/CITS 324-2025 循环肿瘤细胞检测技术质量保证要求

​​《基于患者来源肿瘤类器官的药物敏感性检测技术规范》（T/CITS 323-2025）主要内容总结​​

​​1. 标准概述​​

• ​​目的​​：规范肿瘤类器官药物敏感性检测的技术流程，确保检测的可靠性、安全性和规范性，推动其在精准医疗、新药研发等领域的应用。
• ​​适用范围​​：科研院所、医疗机构、生物医药企业及第三方检测机构开展人源肿瘤类器官药物敏感性检测。
• ​​核心内容​​：涵盖伦理要求、样本采集与处理、类器官培养、药物敏感性检测方法、数据分析和报告生成等全流程技术规范。

​​2. 规范性引用文件​​

• 主要引用《GB/T 38736-2020 人类生物样本保藏伦理要求》，强调伦理合规性和隐私保护。

​​3. 术语和定义​​

• ​​患者来源肿瘤类器官（PDTO）​​：从患者肿瘤组织体外培养的三维立体结构，保留原肿瘤的异质性。
• ​​药物敏感性检测​​：通过体外药物处理评估肿瘤细胞对药物的反应，预测临床疗效。
• 其他关键术语：传代、基质胶、加药等操作的定义。

​​4. 基本要求​​

• ​​伦理要求​​：需通过伦理委员会审查，遵守《人类遗传资源管理暂行办法》等法规。
• ​​知情同意​​：患者需签署书面同意书（附录B提供样表），明确样本用途和隐私权。
• ​​隐私保护​​：严格保密患者信息，符合GB/T 38736-2020要求。
• ​​实施机构资质​​：需具备相应技术能力和资质（附录A详述实施条件）。

​​5. 检测技术规范​​

​​5.1 样本采集、保存与运输​​

• ​​采集要求​​：
  • 手术、穿刺等方式无菌获取，手术样本推荐1 cm³大小，穿刺需多点取材。
  • 离体后尽快处理（不超过72小时），4℃低温运输。
• ​​配套资料​​：需提供患者临床信息（病理分型、分期、治疗史等）。

​​5.2 肿瘤类器官培养​​

• ​​关键步骤​​：
  1. ​​组织处理​​：低温清洗、剪碎、消化为单细胞或小细胞团（活力≥90%）。
  2. ​​接种与培养​​：细胞与基质胶混合后接种，使用特定培养基（含生长因子、抗生素等），37℃、5% CO₂培养。
  3. ​​质量控制​​：
     • 定期显微镜观察生长状态（7天内形成类器官，6-14天明显增殖）。
     • 传代标准：类器官密度80%-90%、直径100-200 μm时进行。
     • ​​鉴定要求​​：H&E染色确认病理一致性，STR分型匹配供体，确保无污染。

​​5.3 药物敏感性检测​​

• ​​实验设计​​：
  • 设置阴性对照、空白组、阳性对照和药物测试组（5-10个浓度梯度，每浓度3-5复孔）。
  • 药物浓度参考临床用药范围。
• ​​操作流程​​：
  1. ​​类器官准备​​：消化过滤后取40-70 μm细胞团，与基质胶混合接种至微孔板。
  2. ​​加药与培养​​：接种1-3天后加药，培养3-6天。
  3. ​​检测指标​​：
     • 形态学观察。
     • 细胞活力检测（如发光法试剂盒）。
• ​​数据分析​​：
  • 质控标准：阴性对照变异系数（CV）<0.22，Z-factor>0.4。
  • 计算相对活力（RCV）、抑制率、IC50、曲线下面积（AUC）等参数。

​​5.4 检测报告​​

• ​​内容要求​​：
  • 类器官生长图片、用药前后对比、量化数据（如IC50）、曲线图、参考文献。
  • 结果呈现形式：抑制率、分级（敏感/耐药）等。
• ​​交付形式​​：纸质或电子版，反馈至患者及临床医师。

​​6. 附录与补充说明​​

• ​​附录A（实施指南）​​：
  • ​​适用人群​​：标准治疗失败、罕见肿瘤、多原发肿瘤或需超说明书用药的患者。
  • ​​技术优势​​：PDTO保留肿瘤异质性，优于传统2D培养模型。
  • ​​自动化趋势​​：建议采用高通量芯片或自动化工作站提升效率。
• ​​附录B（知情同意书样表）​​：
  • 包含患者信息、检测风险告知、隐私条款及数据使用授权。

​​7. 参考文献​​

• 引用国内外法规（如《人类遗传资源管理条例》）及专家共识（如《肿瘤类器官诊治质量控制标准中国专家共识》），强调标准制定的科学依据。

​​核心意义​​

该标准系统化规范了PDTO药物敏感性检测的技术流程，从伦理合规、样本处理到数据分析，为精准医疗提供可靠工具，同时推动类器官技术在科研和临床的标准化应用。