T/ZHCA 031-2024 化妆品舒缓功效测试 淋洗类化妆品温和性评价 重建表皮模型组织活力法

以下是《淋洗类化妆品温和性评价 重建表皮模型组织活力法》（T/ZHCA 031—2024）标准文件的详细内容总结：

​​一、标准基本信息​​

• ​​发布机构​​：浙江省健康产品化妆品行业协会（ZHCA）
• ​​起草依据​​：GB/T 1.1—2020《标准化工作导则》
• ​​适用范围​​：淋洗类化妆品（如洗发水、沐浴露等使用后需清洗的产品）的温和性功效评价。
• ​​核心原理​​：通过测量化妆品对​​重建人表皮模型细胞存活率​​的影响，评估其温和性（即是否引起皮肤异常反应）。

​​二、关键术语定义​​

1. ​​淋洗类化妆品​​：人体表面使用后需及时清洗的产品（皮肤、毛发、甲、口唇等）。
2. ​​温和性​​：产品在合理使用条件下不引起皮肤异常反应的特性。
3. ​​重建表皮模型​​：人表皮细胞体外培养形成的三维结构模型（如EpiKutis™ RHE、SkinEthic™ RHE），需符合特定质检标准。

​​三、试验核心流程​​

​​1. MTT干扰因素排查​​

• ​​与MTT反应排查​​：若样品使MTT溶液变蓝紫色，需增加​​死亡组织模型组​​（-20℃冷冻24小时以上）。
• ​​有色样品干扰​​：若样品溶于异丙醇且OD₅₇₀ ≥ 0.15，需增加死亡模型组校正背景干扰。

​​2. 测试方法（分两种模型）​​

​​3. 通用步骤​​

• ​​模型复苏​​：培养过夜，确保模型与培养基无气泡。
• ​​分组​​：
  • 阴性对照组（水或空白）
  • 阳性对照组（1.0% Triton X-100或0.1% SDS）
  • 受试样品组（±死亡组织模型组）
• ​​暴露后处理​​：
  ① DPBS冲洗至无残留；
  ② MTT染色3小时（37°C）；
  ③ 异丙醇提取甲臢（振荡2小时或4°C过夜）；
  ④ 测定OD₅₇₀（酶标仪，570nm）。

​​四、数据处理与结果判定​​

​​1. 存活率计算​​

• ​​无干扰时​​：
  /text{存活率} = /frac{/text{样品OD} - /text{溶剂OD}}{/text{阴性对照OD} - /text{溶剂OD}} /times 100/%
• ​​有干扰时​​（死亡模型校正）：
  /text{存活率} = /frac{(/text{样品OD} - /text{溶剂OD}) - (/text{死亡样品OD} - /text{死亡阴性OD})}{/text{阴性对照OD} - /text{溶剂OD}} /times 100/%

​​2. 试验有效性条件​​

• 阴性对照组OD₅₇₀ ​​1.0–2.5​​；
• 阳性对照组存活率 ​​<15%​​；
• 复孔间标准偏差（SD）​​<18%​​。

​​3. 温和性评价​​

• ​​温和​​：存活率 ​​≥50%​​；
• ​​需进一步验证​​：存活率 ​​<50%​​（结合其他试验确认）。

​​五、关键试剂与仪器​​

• ​​试剂​​：
  • MTT溶液（1 mg/mL，现配现用）、Triton X-100（1.0%）、SDS（0.1%）、异丙醇、DPBS（无钙镁离子）。
  • 重建表皮模型试剂盒（需提供质检报告）。
• ​​仪器​​：
  • CO₂培养箱（37±1°C, 5% CO₂, ≥95%湿度）、酶标仪（570nm）、移液器、微孔板振荡器。

​​六、试验报告要求​​

报告需包含：

1. 检验依据、样品理化性状；
2. 表皮模型来源及质检信息；
3. 试验步骤细节（分组、暴露条件）；
4. 数据处理方法、结果评价；
5. 试验日期、结论、检验人签字及单位公章。

​​七、参考文献​​

• OECD TG 439（体外皮肤刺激性测试）
• 《化妆品安全技术规范》（2015版）
• GB 3101—1993（量、单位与符号规范）

​​总结​​：该标准通过​​标准化体外重建表皮模型测试​​，以​​细胞存活率​​为核心指标，为淋洗类化妆品的温和性评价提供了可量化、可重复的科学方法，同时严格规范了试验有效性条件与干扰校正流程，确保结果可靠性。